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黃曲霉毒素檢測(cè)方法介紹

時(shí)間:2016-11-23來(lái)源:飛測(cè)生物點(diǎn)擊量:

      在當(dāng)今社會(huì),食品安全受到人們的非常的關(guān)注和重視,尤其發(fā)生了三聚氰胺和地溝油等一系列的事件之后,人們更加的重視食品的安全問(wèn)題。黃曲霉毒素這類真菌在世界不同地區(qū)都發(fā)現(xiàn)大量存在于食品中,它主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類有毒次生代謝物[1–2]。目前已知的黃曲霉毒素及其衍生物有 20 余種 , 即 B1,B2,B2a,G1,G2,G2a,M1,M2 等,黃曲霉毒素 B1 是其中毒性最大的一種,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,其毒性是人們熟知的劇毒藥氰化鉀的 10 倍,是砒霜的 68 倍。黃曲霉毒素 B1 可誘發(fā)癌癥和皮下肉瘤,并且可使動(dòng)物的肝、腎、大腦和神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生病變。自 20 世紀(jì) 60年代以來(lái),有關(guān)黃曲霉毒素的危害被大量報(bào)道,以致黃曲霉毒素已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素[3]。因此,尋求準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、價(jià)廉的檢測(cè)方法,對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行高效的定性定量分析,是黃曲霉毒素研究的一個(gè)重要方面。以下對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)方法研究進(jìn)展進(jìn)行評(píng)述。
1、薄層色譜法
1.1薄層層析(TLC)法
TLC 法是測(cè)定黃曲霉毒素的經(jīng)典方法,在薄層板展開后,在 365 nm 紫外燈下,黃曲霉毒素 B1,B2,G1 和 G2 分別顯示紫色、藍(lán)紫色、綠色和綠色熒光。TLC 法的特異性較差,靈敏度相對(duì)較差,且測(cè)定黃曲霉毒素專一性不夠,經(jīng)常引起測(cè)量誤差。但由于此法設(shè)備簡(jiǎn)單,易于普及,所以國(guó)內(nèi)外仍在使用。
1.2高效薄層(HPTLC)法
HPTLC 法[4–5]測(cè)定黃曲霉毒素采用目前國(guó)際上流行的樣品處理方法——固相萃取法(SPE)中針對(duì)真菌和病毒的多功能凈化(MFC)柱。采用 MFC 柱凈化后,僅用單相展開即可達(dá)到分離測(cè)定的目的,不僅節(jié)省了工作時(shí)間,提高了工作效率,而且進(jìn)一步減少了有毒有害溶劑的用量。Stroka 等[6]將免疫親合柱凈化應(yīng)用于 TLC 法測(cè)定,進(jìn)行單相展開并用熒光密度計(jì)定量,此方法能檢測(cè)含量明顯低于當(dāng)前歐盟標(biāo)準(zhǔn)的黃曲霉毒素。Kamimura 等[7]用HPTLC 方法測(cè)定玉米、花生、蕎麥等樣品,并與通過(guò)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC)認(rèn)證的分析花生及花生制品中黃曲霉素的官方方法 CB(Contamination Branch)法和 BF(Best Foods)法進(jìn)行比較,4 種主要黃曲霉毒素的檢測(cè)限均不高于 0.2 μg/kg,回收率與 CB 法一樣均高于 BF 法。
1.3高壓薄層色譜(OPTLC)法
高壓薄層色譜于 1979 年由 Tyihak 提出[8],它結(jié)合了經(jīng)典薄層色譜法、高效薄層色譜法與高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn),是一種能夠提高薄層分離效率的平面液相色譜技術(shù)。隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷成熟,OPTLC 法在飼料和食物中黃曲霉毒素的檢測(cè)方面的應(yīng)用越來(lái)越多。Eszter Papp 等[9]發(fā)展了一系列適合檢測(cè)玉米和小麥中黃曲霉毒素的 OPTLC 方法。
2、高效液相色譜(HPLC)法
由于具有穩(wěn)定、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn),HPLC 法已成為當(dāng)前進(jìn)行黃曲霉毒素定量研究的首選方法。分析黃曲霉毒素的液相色譜方法包括正相液相色譜方法(NPLC)和反相液相色譜方法(RPLC)。反相高效液相色譜 (RP-HPLC) 系統(tǒng)易操作,流動(dòng)相具有低毒性,可同時(shí)分離、分析樣品中黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2且不受樣品沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性、和分子量限制,所以目前使用熒光檢測(cè)器的反相HPLC 法已經(jīng)成為檢測(cè)黃曲霉毒素的主要測(cè)定方法[10]。

Chiavaro 等[11]根據(jù)不同環(huán)式糊精增強(qiáng)黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1 熒光釋放的不同效果,發(fā)展了將環(huán)式糊精加入到流動(dòng)相中的高效液相色譜法,黃曲霉毒素 B1,B2,G1,G2 的檢測(cè)限均在 0.3 μg/kg 以下,M1 的檢測(cè)限在 0.000 5 
μg/kg 以下,幾種黃曲霉毒素都呈線性反應(yīng)關(guān)系。這種方法也被用于測(cè)定自然污染及人工添加樣品。
3、免疫學(xué)方法
黃曲霉毒素的免疫學(xué)檢測(cè)方法是將生物大分子的免疫學(xué)特性與化學(xué)特性結(jié)合起來(lái)的檢測(cè)方法。該方法具有快速、靈敏、對(duì)樣品純度要求不高的特點(diǎn),特別適合于大批量樣本的檢測(cè)。用于檢測(cè)黃曲霉毒素的免疫學(xué)方法有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、放射免疫測(cè)定法、親和層析法、熒光偏振免疫測(cè)定法及免疫層析法。
3.1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA) 法
ELISA 法是在免疫學(xué)和細(xì)胞工程學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展出來(lái)的一種微量檢測(cè)技術(shù),分為直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法,其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)黃曲霉毒素 B1 的檢測(cè)定性定量準(zhǔn)確而且檢測(cè)速度快(比薄層法提高了近 200 倍)[12],特異性強(qiáng),熒光物質(zhì)、色素、結(jié)構(gòu)類似物對(duì)結(jié)果無(wú)干擾,回收率高,提取方法簡(jiǎn)單,成本較低,特別適合于對(duì)黃曲霉毒素 Bl 污染監(jiān)測(cè)控制中大量樣品的篩查[13–14]。缺點(diǎn)是 ELISA 法中酶的活性易受反應(yīng)條件影響,測(cè)定結(jié)果重復(fù)性較差,測(cè)定結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性問(wèn)題;此外 ELISA 試劑壽命短,需要低溫保存,葡萄酒類、含鹽量高的醬油、含脂量高的花生油在提取時(shí)要進(jìn)行調(diào)節(jié)pH 值、脫鹽、脫脂等特殊處理。
3.2親和層析法
親和層析法利用免疫化學(xué)反應(yīng)原理,采用大劑量的單克隆抗體,選擇性吸附提取液中的抗原物質(zhì)黃曲霉毒素。由于抗原 – 抗體反應(yīng)具有高靈敏、高選擇、高特異性等特點(diǎn),從而大大提高了試樣的凈化效果及檢測(cè)靈敏度,同時(shí)可顯著減少有毒有害試劑的使用,有利于操作人員的身體健康和環(huán)境保護(hù)。
3.3放射免疫 (RIA) 法
RIA 法與 ELISA 法基本相似,不同的是它們所使用的標(biāo)記物不同,ELISA 法的標(biāo)記物為酶,RIA 法所用的標(biāo)記物一般為放射性元素氚 (3H)。該方法是將毒素 –3H 標(biāo)記物與樣品加抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,除去未結(jié)合的部分,測(cè)定其放射性,放射性強(qiáng)則說(shuō)明樣品中毒素含量低,反之毒素含量高[15]。實(shí)驗(yàn)證明 ELISA 比 RIA 靈敏度更高且更簡(jiǎn)便,并且RIA 需要特殊設(shè)備,有放射性元素污染問(wèn)題,人員需要安全防護(hù),現(xiàn)在已經(jīng)很少使用。
3.4熒光偏振免疫測(cè)定法
熒光偏振免疫測(cè)定法的主要原理是熒光標(biāo)記的毒素在樣品緩沖液中與未熒光標(biāo)記的毒素對(duì)特異性抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。分子質(zhì)量越大,分子旋轉(zhuǎn)速度越慢,熒光偏振值越大。Nasir 等[16]報(bào)道了用基于熒光偏振的裝置檢測(cè)不同谷物中的黃曲霉毒素。
3.5免疫層析(IC)法
IC 法是 20 世紀(jì) 80 年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速免疫分析技術(shù),其操作簡(jiǎn)單,快速,人員不用培訓(xùn),且不需特殊的儀器設(shè)備,非常適用于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試和進(jìn)行大量樣品的初篩[17]。
4、免疫學(xué)與儀器結(jié)合方法
近年來(lái),隨著黃曲霉毒素在食品中的檢出標(biāo)準(zhǔn)越來(lái)越嚴(yán)格,很多人采取了免疫學(xué)與儀器結(jié)合的方法來(lái)檢測(cè)黃曲霉毒素,發(fā)展了黃曲霉毒素的檢測(cè)方法。
4.1免疫親和柱凈化熒光光度法
張藝兵等[18]提出了一種以免疫親和柱凈化結(jié)合熒光光度法檢測(cè)黃曲霉毒素的新方法,此法利用抗原抗體——對(duì)應(yīng)的特異吸附特性,以黃曲霉毒素單克隆抗體為填充柱,特異性、選擇性地吸附黃曲霉毒素,再以甲醇為流動(dòng)相將結(jié)合的黃曲霉毒素洗脫下來(lái)然后通過(guò)溴溶液衍生,所得衍生物可發(fā)射熒光,再通過(guò)熒光光度計(jì)分析即可以測(cè)定毒素含量。此方法克服了 TLC 法和 HPLC 法在操作過(guò)程中使用劇毒的真菌毒素作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物和在樣品預(yù)處理過(guò)程中使用多種有毒、有異味的有機(jī)溶劑對(duì)操作人員造成身體傷害和污染環(huán)境的缺點(diǎn),所需儀器設(shè)備輕便易攜帶,自動(dòng)化程度高,操作簡(jiǎn)單,靈敏度可達(dá) 1 μg/kg,回收率在 85%以上。一個(gè)樣品只需10~15 min 便能直接讀出測(cè)試結(jié)果,比傳統(tǒng)方法快幾個(gè)小時(shí)甚至幾天時(shí)間。缺點(diǎn)是此法只能測(cè)定黃曲霉毒素的總量且對(duì)試劑要求比較高,檢測(cè)中藥材黃曲霉毒素的含量時(shí)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一些假陽(yáng)性。
4.2免疫親和柱高效液相色譜法
免疫親和柱(IAC)是將特異性的黃曲霉毒素單克隆抗體與載體蛋白偶聯(lián)并填柱而成。由于抗原抗體有一一對(duì)應(yīng)的特異性吸附關(guān)系,所以 IAC 能特效性地、高選擇性地吸附黃曲霉毒素,而讓其它雜質(zhì)通過(guò)柱子,使樣品得以純化,吸附的黃曲霉毒素可以被極性有機(jī)溶劑洗脫,再用 HPLC 法進(jìn)行定量檢測(cè)[19],其優(yōu)點(diǎn)是具有高度特異性,可除去絕大多數(shù)干擾物質(zhì),檢測(cè)限達(dá) 1 ng/g,還具有快速、溶劑使用少、可以自動(dòng)化和再生利用的特點(diǎn)。缺點(diǎn)是柱成本高,商品化 IAC 僅適合幾種毒素,有時(shí)需要加預(yù)柱凈化。
4.3多功能凈化柱高效液相色譜法
Wilson 和 Romer[20]開發(fā)了獨(dú)特的真菌毒素多功能凈化 (MFC) 柱,MFC 柱提供一種快速的一步萃取純化方法,工作原理和操作過(guò)程與其它凈化柱相反,它含有親脂性 ( 非極性 ) 和電荷活性成分 ( 極性 ),當(dāng)樣品提取液通過(guò)柱時(shí),MFC柱保留樣品液中的干擾物質(zhì)如脂肪、蛋白質(zhì)類化合物和碳水化合物等,而待測(cè)組分黃曲霉毒素不被吸附而直接通過(guò),從而一步完成凈化過(guò)程,除去 90%的雜質(zhì),減少了傳統(tǒng)凈化方式淋洗雜質(zhì)和洗脫待測(cè)樣品的步驟,從而達(dá)到凈化目的,這一點(diǎn)是 IAC 和普通 SPE 凈化柱所不具備的,并且與 IAC 相比凈化效果同樣理想,回收率高,靈敏度高,檢測(cè)限低。
5、超光譜(HS)法
一直以來(lái),黃曲霉毒素的檢測(cè)都用化學(xué)方法,并且有些化學(xué)方法的檢測(cè)結(jié)果非常準(zhǔn)確,但是化學(xué)方法都要耗費(fèi)大量的檢測(cè)時(shí)間,檢測(cè)費(fèi)用較高且損壞檢測(cè)樣品,所以研究一種快速、準(zhǔn)確、無(wú)損樣品的檢測(cè)方法對(duì)糧食產(chǎn)業(yè)是至關(guān)重要的,超光譜法檢測(cè)黃曲霉毒就是這樣一種方法。它的原理是首先通過(guò)光源激發(fā)待測(cè)樣品,再通過(guò)設(shè)備捕捉成像,然后對(duì)成像進(jìn)行特征抽取和特征排列,最后實(shí)現(xiàn)區(qū)別受黃曲霉毒素污染和未受黃曲霉毒素污染的樣品。
Haibo Yao[21]等利用超光譜法分析了長(zhǎng)波紫外線激發(fā)下的玉米粒的光譜 BGYF 響應(yīng),首先用中心激發(fā)波長(zhǎng)為 365 nm 的紫外線光照射檢測(cè)樣品,被檢測(cè)到黃綠色熒光的玉米粒,手動(dòng)挑選出來(lái),結(jié)果顯示,在 500~515 nm 波長(zhǎng)范圍具有較強(qiáng)的黃綠色熒光發(fā)射光譜峰,選取 500~515 nm 有較強(qiáng)黃綠色熒光的玉米粒作為陽(yáng)性組,用高效液相色譜法測(cè)定,與正常組對(duì)比,呈黃綠色熒光成像的黃曲霉毒素濃度的平均水平濃度是 5.114 μg/g。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明了玉米只有在感染黃曲霉毒素多的時(shí)候才會(huì)發(fā)出黃綠色熒光,所以根據(jù) BGYF 測(cè)量黃曲霉毒素的含量是不準(zhǔn)確的。
Haibo Yao 等[22]還發(fā)現(xiàn)感染黃曲霉毒素的玉米會(huì)發(fā)生峰偏移現(xiàn)象,受黃曲霉毒素感染高的玉米粒其光譜峰會(huì)向長(zhǎng)波方向移動(dòng),未受感染或者感染率低的玉米粒光譜峰會(huì)向短波方向移動(dòng),并且受黃曲霉毒素感染高的玉米粒比未受感染的玉米粒光譜峰強(qiáng)度低。使用超光譜法和光譜角度映射分類法對(duì)樣品測(cè)試,樣品熒光強(qiáng)度不敏感但對(duì)峰的變化敏感[23],對(duì)待測(cè)玉米以 20,100 ng/g 為臨界值做檢測(cè),分類精度為 86%時(shí)有 15%的假陽(yáng)性率,88%時(shí)有 16%的假陽(yáng)性率,結(jié)果表明,超光譜法和光譜角度映射分類法可以對(duì)感染與非感染玉米進(jìn)行分類。
Haibo Yao 等[24]用中心波長(zhǎng)為 365 nm 的紫外光激發(fā)待測(cè)玉米,用最大相似率和二進(jìn)制編碼兩種算法分別對(duì)臨界值為20,100 ng/g 進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并與 HPLC 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)二進(jìn)制編碼比最大相似率分類精確,20 ng/g 和 100 ng/g 的分類精度分別為 87%,88%。
Pearson 等[25]發(fā)現(xiàn)在 BGYF 光很弱的時(shí)候利用該檢測(cè)系統(tǒng)無(wú)法檢測(cè)到 BGYF。他用一個(gè)硅光電二極管光纖光譜儀通過(guò)辨別分析,利用光的反射比從含量小于 10 ng/g 或者沒有被污染的玉米中檢測(cè)出受黃曲霉毒素污染大于 100 ng/g 的玉米,分類精度達(dá)到 96.6%。
Kalkan 等[26]在 365 nm 的紫外燈下分析了 285 個(gè)榛子樣品,在 440~450 nm 該鑒別能力最強(qiáng)的譜帶分類精度達(dá)到 90%。Musa Ata 等[27]用超光譜法對(duì)紅辣椒進(jìn)行實(shí)驗(yàn),選擇鹵素?zé)艉妥贤夤鈨煞N光源進(jìn)行對(duì)比,在對(duì)成像進(jìn)行特征抽取時(shí)分為單獨(dú)頻帶能量特征和連續(xù)絕對(duì)差異光譜波段能量?jī)煞N,在成像的特征排列中用了最低冗余和最大相關(guān)性(mRMR)及多層感知器連接權(quán)重(MLP),并對(duì)單獨(dú)頻帶能量特征和連續(xù)差異光譜波段能量使用了量子直方圖矩陣方法,并與 HPLC 檢測(cè)結(jié)果做了對(duì)比,最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明光源采用鹵素?zé)簟⑻卣髋帕蟹椒ú捎肕LP 法的分類精度最高(達(dá) 91%)。Haibo Yao 等[28]研究了窄頻帶光譜指數(shù)加速檢測(cè)黃曲霉毒素的方法,原先因?yàn)槭艿桨l(fā)射響應(yīng)的限制,成像的強(qiáng)度位準(zhǔn)比較低,全部的檢測(cè)結(jié)果持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng),而窄頻帶光譜可以使這種情況得到改善。首先用歸一化差異熒光指數(shù)(NDFI)、差異化指數(shù)(DFI)、熒光率指數(shù)(FRI)3 個(gè)指數(shù)與多譜線成像系統(tǒng)進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)兩個(gè)系統(tǒng)的 NDFI 指數(shù)有最好的相關(guān)性,然后用窄頻帶光譜對(duì)25 g 和 1 kg 的樣品分別做了臨界值為 20,100 ng/g 的實(shí)驗(yàn),并與 HPLC 進(jìn)行比較。25 g 樣品 20,100 ng/g 的分類精度為 83.33%,85.26% ;1 kg 樣品 20,100 ng/g 的分類精度為69.23%,95.73%。6針對(duì)黃曲霉毒素 B1 的快速檢測(cè)方法因?yàn)辄S曲霉毒素 B1 是黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)的,所以隨著對(duì)黃曲霉毒素研究的深入,產(chǎn)生了很多對(duì)其快速檢測(cè)的方法。
6.1免疫親和微柱檢測(cè)法
免疫親和微柱檢測(cè)法的原理是試樣提取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋后,通過(guò)黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱。黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱是由偶聯(lián)有黃曲霉毒素 B1 抗體的免疫親和微球填充而成的,而此抗體對(duì)黃曲霉毒素 B1 具有專一性,樣液中黃曲霉毒素 B1 被抗體捕獲,雜質(zhì)隨洗滌液流出微柱,再以甲醇將黃曲霉毒素 B1 洗脫,洗脫液采用熒光光度法根據(jù)黃曲霉毒素 B1 檢測(cè)工作曲線測(cè)定黃曲霉毒素 B1 的含量。朱劍[29]等用免疫親和微柱法對(duì)大米,油脂,玉米粉做了黃曲霉毒素的檢測(cè)并與酶聯(lián)免疫吸附法作了比較,發(fā)現(xiàn)兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和靈敏度都比較高,免疫親和微柱法比ELISA 的重復(fù)性好,對(duì)植物油中黃曲霉毒素 B1 含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。ELISA 一次可以檢測(cè)多個(gè)樣本,適于大批量樣 黃潔:黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展 103品快速篩選,免疫親和微柱法一次只能檢測(cè)一個(gè)樣本,適于單一樣品現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),都比較適合基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。
6.2一步式金標(biāo)試紙法
金標(biāo)免疫層析 (GICA) 是 20 世紀(jì) 80 年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速免疫診斷技術(shù)。一步式黃曲霉毒素檢測(cè)金標(biāo)試紙法是利用單克隆抗體而設(shè)計(jì)的固相免疫分析法,快速檢測(cè)試紙利用納米金作為標(biāo)記物,可在 5~10 min 完成對(duì)樣品中黃曲霉毒素的定性測(cè)定。它不需進(jìn)行結(jié)合標(biāo)記物與自由標(biāo)記物的分離,省去了繁瑣的加樣、洗滌步驟,不僅提高了檢測(cè)速度,而且檢測(cè)過(guò)程中無(wú)需處理試劑,真正實(shí)現(xiàn)了一步式檢測(cè)[30]。
Zhang 等[31]利用一步式金標(biāo)試紙法分析一個(gè)樣品,用時(shí)不到 10 min。在金標(biāo)免疫試紙法的應(yīng)用過(guò)程中,孫秀蘭等[32]研究了樣品基質(zhì)對(duì)試紙條信號(hào)靈敏度的影響,為消除這些影響提供了經(jīng)驗(yàn)。
鄧省亮等[33]用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒,標(biāo)記為抗黃曲霉毒素 B1。單克隆抗體并噴于玻璃纖維上,黃曲霉毒素 B1 偶聯(lián)抗原和二抗分別結(jié)合于硝酸纖維膜上,依次將樣本墊、膠金墊、硝酸纖維膜和吸水紙組裝切割成膠體金試紙條并裝入檢測(cè)卡中。測(cè)試結(jié)果表明,黃曲霉毒素 B1 快速檢測(cè)試紙條的靈敏度為 5 ng/mL,檢測(cè)時(shí)間為 10 min,批內(nèi)和批間重復(fù)性 100%,假陽(yáng)性率和假陰性率均為 0。
6.3時(shí)間分辨熒光免疫分析法 (TRFIA)
TRFIA 是超微量檢測(cè)中一項(xiàng)新興檢測(cè)技術(shù),靈敏度較放射免疫分析 (RIA) 高出 3 個(gè)數(shù)量級(jí)。TRFIA 原理與 ELISA一致,不同的是 TRFIA 采用了一種特殊的標(biāo)記物,即 3 價(jià)稀土離子 (Eu3+,Tb3+等 ) 代替酶標(biāo)記物或其它熒光物,用時(shí)間分辨熒光儀測(cè)定產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度,從而判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度,達(dá)到定量分析的目的。TRFIA 利用稀土元素?zé)晒獠ㄩL(zhǎng)與其激發(fā)波長(zhǎng)的巨大差異克服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的影響,可大幅度提高分析的靈敏度。黃飚等[34]采用自制黃曲霉毒素 B1 全抗原和多克隆抗體,構(gòu)建了一套較為完整的黃曲霉毒素 B1-TRFIA 檢測(cè)平臺(tái),具有較好的分析穩(wěn)定性,靈敏度達(dá)到 0.003 9 μg/L,線性范圍 0.003 9~100 μg/L。靈敏度和測(cè)量范圍均超越了市場(chǎng)上常用的進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑 ( 分別為 0.1 μg/L 和0.1~10 μg/L),經(jīng)過(guò)多方面考核,各項(xiàng)指標(biāo)符合標(biāo)記免疫試劑的要求,對(duì)食品、飼料等樣本檢測(cè)效果均佳,具有很好的應(yīng)用前景。
7、結(jié)語(yǔ)
綜上所述,黃曲霉毒素具有高的致癌、致畸性,因而受到全世界的廣泛關(guān)注。在人們對(duì)食品安全的意識(shí)不斷提高的今天,加強(qiáng)對(duì)黃曲霉毒素的監(jiān)控和檢測(cè)非常必要。縱觀其發(fā)展趨勢(shì),主要有兩個(gè)發(fā)展方向,即對(duì)現(xiàn)有方法的改進(jìn)和新方法的開發(fā)。常用的檢測(cè)黃曲霉毒素的方法,即薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法及高效液相色譜法,因檢測(cè)速度慢、精確度低、檢測(cè)費(fèi)用高等原因而影響了對(duì)黃曲霉毒素監(jiān)控的廣泛性及檢測(cè)的即時(shí)性,需要加以改進(jìn)。傳統(tǒng)檢測(cè)方法的不足促使黃曲霉毒素快速、準(zhǔn)確檢測(cè)方法的研發(fā),例如超光譜法,它是一種無(wú)侵入性,無(wú)損性,快速、準(zhǔn)確檢測(cè)黃曲霉毒素的新方法,已經(jīng)使用它對(duì)花生,玉米,辣椒,堅(jiān)果類等進(jìn)行了黃曲霉毒素的檢測(cè),并且準(zhǔn)確度較高,是以后發(fā)展的方向;還有像電子鼻法、生物傳感器等方法還不完善,需要改進(jìn),未來(lái)這些方法的發(fā)展會(huì)使快速、準(zhǔn)確、安全的檢測(cè)黃曲霉毒素成為可能。

黃曲霉毒素B1定量檢測(cè)卡

       上海飛測(cè)生物基于全球領(lǐng)先的時(shí)間分辨熒光定量POCT檢測(cè)技術(shù)平臺(tái),推出了黃曲霉毒素B1快速定量檢測(cè)儀黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測(cè)卡,以可在10min內(nèi)快速準(zhǔn)確定量的測(cè)定各種糧食谷物、油料作物、植物油、飼料原料及部分飼料中黃曲霉毒素B1的含量,樣品前處理簡(jiǎn)單,操作簡(jiǎn)便,采用熒光讀數(shù)儀讀數(shù),結(jié)果準(zhǔn)確可靠,適用于各類糧食、糧油、飼料加工企業(yè)、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)及各級(jí)政府監(jiān)管部門。


操作視頻地址:http://v.youku.com/v_show/id_XMTcyMTU4NTMzMg==.html


一、黃曲霉毒素B1熒光定量檢測(cè)卡性能

1、 靈敏度:0.5ng/mL;
2、 定量線性范圍:1.0ng/mL - 50.0 ng/mL;

3、樣品前處理時(shí)間:8min;

4、檢測(cè)時(shí)間:10min;
5、準(zhǔn)確度:添加回收率為80%-125%;
6、 特異性:在1000 ng/mL濃度水平下與其它真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng);

黃曲霉毒素B1檢測(cè)卡

二、黃曲霉毒素B1熒光定量檢測(cè)檢測(cè)流程示意圖   

黃曲霉素B1熒光定量檢測(cè)卡樣品前處理過(guò)程


三、黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)儀結(jié)果判讀和輸出
      黃曲霉素B1熒光定量檢測(cè)卡采用便攜式熒光免疫分析儀進(jìn)行讀數(shù),使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、客觀,避免人為的誤判。

黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)儀

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